10.22028\/d291-22432<\/a><\/p>\nAuthors:<\/h4>\n
Bilgin Vatansever<\/p>\n
Abstract:<\/h4>\n
Aufgrund der immer noch hohen Zahl an offenen Fragenstellungen in den Biowissenschaften gilt die Proteomanalyse als eine der wichtigsten Forschungsgebiete in der Bioanalytik, welche sich intensiv mit der Aufkl\u00e4rung der Gesamtheit aller Proteine der Zelle besch\u00e4ftigt. Auf dem Weg zum L\u00f6sen der Fragestellungen spielt die Schnelligkeit und die Zuverl\u00e4ssigkeit der ausgew\u00e4hlten Analysenmethode eine gro\u00dfe Rolle. Aufgrund der geringen Menge an verf\u00fcgbarem Probenmaterial werden h\u00e4ufig miniaturisierte chromatographische Trenntechniken wie Mikro-HPLC innerhalb der biowissenschaftlichen Forschung eingesetzt, welche mit verschiedenen massenspektrometrischen Detektionstechniken kombiniert werden. In der vorliegenden Arbeit wurde ein Elektrospay-Ionisation-(ESI)-Ionenfallen- Massenspektrometer sowohl f\u00fcr die qualitativen als auch f\u00fcr die quantitativen Analysen verwendet, welches sich auch als sehr empfindliche und schnelle Detektionsmethode herausstellte. Im ersten praktischen Teil der Arbeit wurden Gliadine identifiziert, die zu den Glutenproteinen geh\u00f6ren. Die erste Art der Identifizierung wurde mit Hilfe der intakten molekularen Massen der Gliadine durchgef\u00fchrt. Zu diesem Zweck wurde eine Tuningmethode durch Verwendung von Cytochrom-C optimiert. Mit dem optimierten System wurden unter 17 verschiedenen Peaks insgesamt 41 Proteinmassen ermittelt. Daraus wurden zwei a\/\u00df-Gliadine, ein a-Gliadin und drei γ-Gliadine identifiziert. Da die zumal mit der Genauigkeit einer Ionenfalle – gemessene Proteinmasse keinesfalls ausreichende Informationen zur Proteinidentifizierung liefert, wurden als zweiter Weg die Proteine chymotryptisch und peptisch verdaut. Anschlie\u00dfend wurden die resultierenden Peptide mittels Tandem-MS durch Peptidfragmentfingerprinting (PFF)identifiziert. Mit Hilfe einer Kombination der Suchmaschinen Mascot, InsPect, OMSSA und deren Algorithmen wurden die Peptide identifiziert. Zur Identifizierung konnten diese sechs Gliadine eindeutig nach ihrer Gliadinfamilie zugeordnet werden. Eine eindeutige Identifizierung dieser sechs Gliadine war jedoch aufgrund der Homologie nicht m\u00f6glich. Im zweiten Teil der vorliegenden Arbeit wurde eine Quantifizierungsmethode entwickelt, mit der ein toxisches 30-mer Peptid quantifiziert wurde. Das toxische 30-mer Peptid wurde durch peptischen Verdau in Gegenwart einer besonderen aktiven Denaturierungssubstanz (RapiGestTM) aus einem Weizenextrakt gewonnen. Dabei wurden die Verdaubedingungen hinsichtlich der Verdauzeit optimiert. Entsprechend dieser Optimierungsstudien wurden vier parallele peptische Verdaue zur Bestimmung der Reproduzierbarkeit und zur Quantifizierung durchgef\u00fchrt. Die Kalibrierung f\u00fcr die absolute Quantifizierung wurde mit einem isotopenmarkierten internen Standard vorgenommen. Als interner Standard wurde ein Peptid verwendet, welches dieselbe Sequenz des toxischen 30-mer Peptides hatte und am N-terminalen Valin durch sechs C-13-Atome isotopenmarkiert war. Der letzte Schritt dieser Quantifizierungsstudie bestand in der Auswertung der Rohdaten nach einem Feature-Finder-Algorithmus mit dem Ziel, dass durch die Automatisierung der Auswertungsprozesse eine schnelle Datenauswertung erreicht werden kann. Zur Kontrolle der automatischen Auswertung wurde eine manuelle Auswertung der Daten durchgef\u00fchrt. Dabei wurde eine gute \u00dcbereinstimmung der Ergebnisse beider Auswertungsprozesse festgestellt. Um diese Quantifizierungsmethode in der allt\u00e4glichen Praxis der Lebensmittelindustrie zu realisieren, wurde anschlie\u00dfend zu diesem Zweck das toxische 30-mer Peptid in einem kommerziell erh\u00e4ltlichen Weizenmehl von Typ 405 erfolgreich qualitativ und quantitativ untersucht.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
DOI: 10.22028\/d291-22432 Authors: Bilgin Vatansever Abstract: Aufgrund der immer noch hohen Zahl an offenen Fragenstellungen in den Biowissenschaften gilt die Proteomanalyse als eine der wichtigsten Forschungsgebiete in der Bioanalytik, welche sich intensiv mit der Aufkl\u00e4rung der Gesamtheit aller Proteine der Zelle besch\u00e4ftigt. Auf dem Weg zum L\u00f6sen der Fragestellungen spielt die Schnelligkeit und die Zuverl\u00e4ssigkeit […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[11],"tags":[],"class_list":["post-949","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-m-470-ac-dc-sds"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/949","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=949"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/949\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=949"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcategories&post=949"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/citations.tools.bio-logic.fr\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Ftags&post=949"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}